Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩充

从第一次显现肾脏自身免疫球细胞到显现1同型肝炎病理副作用的困难重重率在婴幼儿一时期就有很好的刻画，多个肾脏自身免疫球细胞乙型肝炎的婴幼儿记事70%在小鼠转换后10年内患上肝炎，而随访15年的婴幼儿这一百分比提高到84%。相比，占病理1同型肝炎一半以上的同型1同型肝炎的发病机制还无法给与充分的研究课题。

越来越多的人开始常用分期系统来定义1同型肝炎的困难重重：生殖在显现多种肾脏自身免疫球细胞时带入第1先决条件，显现血糖诱发时带入第2先决条件，显现副作用时带入第3先决条件。一些多发肾脏自身免疫球细胞乙型肝炎的生殖，在1期和2期，困难重重较慢，并发展为发病的1同型肝炎。我们之前刻画了一组在首次检测到多种肾脏自身免疫球细胞样品后至少10年无肝炎的极慢困难重重者，这组病症数量少，但特征更为明确。随后，我们发现肾脏自身淋巴细胞质特异性CD8+T细胞质催化在困难重重比较慢的病症里面基本不依赖于，但在近期发病和长期依赖于的肝炎病症里面很容易检测到。这意味著表明，与困难重重病症相比，这些病症自身免疫催化的调控增强。

早期研究课题表明，尽管调控性T细胞质(Treg)数量显现诱发，但肝炎病症依赖于一些功能缺陷，其里面还包括对IL-2的催化能力提高。此外，肝炎病症里面的物理现象CD4+T细胞质意味著对调控更具抵抗性，展现出为物理现象T细胞质的消除减弱，自然产生的Treg和排泄产生的抑制Treg，以及淋巴细胞质经历的CD4+T细胞质里面IL-2催化减弱。本研究课题的目的是刻画了CD4+调控性T细胞质(Treg)在一小群极比较慢困难重重者里面的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以群体为基础的主干研究课题，在21岁以下住院的病症亲属里面安全检查1同型肝炎的危险因素。我们之前刻画了长期比较慢困难重重者的特征，他们保持良好多重肾脏自身免疫球细胞乙型肝炎超过10年，但无法显现肝炎的病理副作用，慢性或非神经性自身免疫。随后，10名暂时保持良好无肝炎并愿意提供大量体液样品的比较慢困难重重者纳入T和B细胞质功能数据分析。在现在的研究课题里面，8名慢困难重重者(SP组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的肾脏自身免疫球细胞乙型肝炎。所有的参与者都位处1同型肝炎困难重重的1期，尽管一些人随后一落千丈了肾脏自身免疫球细胞对某些淋巴细胞质的乙型肝炎，然而，一名病症之前位处2期至少6年，但无法显现病理副作用，一名病症被诊断为肝炎，该人脑72岁，在采集实验样品时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里面对该NAD进行时了基本上评估。分离外周血单个核分裂细胞质(PBMCs)，采用多给定流式细胞质忍术和T细胞质消除试验评估NAD里面Treg的频对光、表同型和功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类认定、表征和重归)进行时无指派聚类数据分析，评估Treg表同型。

结果：与生活品质NAD相比，来自慢困难重重体的无意识CD4+T细胞质的指派聚类推测，激活的无意识CD4+ Treg频对光提高，与糖皮质激素抑制的TNFR相关细胞(GITR)透露提高有关。一名HbA1c上升的病症与困难重重比较慢者和最简单的依此组相比，Treg对光有所多种不同。功能新发现，与生活品质NAD相比，来自比较慢困难重重体的Treg介导的CD4+物理现象T细胞质消除明显毁坏。展现出为对物理现象CD4+T细胞质CD25和CD134透露的消除提高。

三幅1 深入的表同型数据分析推测，CD4+Treg亚同型在慢困难重重字段里面提高。由FlowSOM生成的Treg室，周围在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞质上。根据记号物透露认定出10个元簇:无意识T细胞质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;无意识T cell_4;CD49b无意识T细胞质;HLA-DR + GITR +无意识T细胞质;线或程Treg_1;线或程Treg_2;线或程Treg_3;和线或程Treg_4。(a)常用9个多种不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个端口都是一个集群(100个集群)，较小的元集群(10个元集群)在端口组周围上色。每个端口里面的点心三幅透露单个记号的透露级别。(b)每个元聚类的热三幅，以推测整体记号透露。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成三幅，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的基岩。(e-l)相比轻元素为每个metacluster箱线或三幅(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP组:线或程Treg_2 (e),线或程Treg_3 (f),线或程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +无意识T细胞质(h)、无意识T cell_1(i),无意识T cell_2 (j),无意识T cell_3 (k) n d CD49b无意识T细胞质(l)。紫色格子都是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模同型证实，Treg频对光的提高是困难重重比较慢的标志。基准离子通道(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞质上的不同。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的都是性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR透露进行时分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组以及NADSP 606(紫色)里面CD25+ cd127的频对光核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的箱线或三幅;(c) HLA-DRloGITR−(线或程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线或程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线或程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线或程T cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3透露切变着色，箭头引人注目的簇被识别系统为SP和HD字段二者之间的多种不同。(j)箱线或三幅推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)组里面，CITRUS无意识Treg_3和Treg_4的相比轻元素(百分比)。(k)控制点推测每个簇的表同型(粉红色)和Treg记号相比透露与文化背景透露(紫色);上列，线或程Treg_3;下面一行，线或程Treg_4。文化背景与所有其他簇里面记号的透露有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

三幅3 与生活品质献血者相比，困难重重比较慢者无意识treg的GITR提高。每个无意识CD4+T细胞质元簇(无意识T细胞质_1;无意识T cell_2;无意识T cell_3;CD49b +无意识T细胞质;HLA-DR + GITR +无意识T细胞质;线或程Treg_2;线或程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个透露记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的透露热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)无意识Treg_4元簇里面所有HD(红色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR透露串联，推测控制点(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NAD还包括，p< 0.05(紫色)NADSP 606和最简单的HD不还包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR透露，从基准离子通道，从所有HD(红色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)串联，推测控制点(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

三幅4 来自比较慢困难重重的CD4+ treg细胞质控制物理现象CD4+T细胞质的能力提高。SP组用紫色的线或和格子透露，HD组用金色的线或和格子透露，紫色的线或/格子透露NADsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞质进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被记号为CFSE, Treg按辨别的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞质，培训3天后进行时流式细胞质忍术检测。(a-d)与CD4+转发者相比应的treg培训(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者培训。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除一般而言。常用乙型肝炎依此(激活的响应细胞质含treg)计算消除一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 物理现象CD4+T细胞质对比较慢困难重重的T细胞质活化的消除更敏感。SP组用紫色的线或和格子透露，HD组用金色的线或和格子透露，紫色的线或/格子透露NADsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞质进行时分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel记号，treg按辨别的百分比滴定。用抗CD3 /28微珠活化细胞质，培训3天后进行时流式细胞质忍术(CD25反染)和细胞质因子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同培训。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除百分比(b)。(c,d) CD25消除百分比(c)和CD134消除百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的透露。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自比较慢困难重重子的活化无意识CD4+Treg在GITR透露里面给与了扩展和丰富多彩，务实了进一步研究课题Treg在1同型肝炎风险生殖里面的值得注意的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28